潤膚膏霜霉菌總數(shù)檢驗(yàn)主要基于霉菌在特定培養(yǎng)基上的生長特性。霉菌在適宜的營養(yǎng)、溫度、濕度等條件下，能夠在培養(yǎng)基中攝取養(yǎng)分并不斷繁殖，形成肉眼可見的菌落。通過將潤膚膏霜樣品進(jìn)行稀釋處理，使其中的霉菌均勻分散，再將稀釋液接種到適合霉菌生長的培養(yǎng)基上，經(jīng)過一定時(shí)間的培養(yǎng)，培養(yǎng)基上生長出的霉菌菌落數(shù)量，就能夠反映出原潤膚膏霜樣品中的霉菌含量情況。

　　潤膚膏霜霉菌總數(shù)檢驗(yàn)方法

　?。?）樣品稀釋

　　稱取25g潤膚膏霜樣品，放入裝有225mL無菌生理鹽水并帶有玻璃珠的三角瓶中。玻璃珠的作用是在振蕩時(shí)，幫助將樣品充分分散，使霉菌均勻分布在生理鹽水中。使用電動(dòng)振蕩器或手搖振蕩，振蕩時(shí)間不少于20分鐘，確保樣品與生理鹽水充分混合，得到1:10的樣品勻液。

　　用1mL無菌吸管吸取1:10樣品勻液1mL，注入裝有9mL無菌生理鹽水的試管中，吹吸3次，使充分混勻，此為1:100的稀釋液。換用一支1mL無菌吸管，從此試管中吸取1mL稀釋液，注入另一裝有9mL無菌生理鹽水的試管中，再次混勻，制成1:1000的稀釋液。依此類推，根據(jù)樣品中霉菌污染程度的預(yù)估，可繼續(xù)進(jìn)行適當(dāng)倍數(shù)的稀釋，如1:10000等。

　?。?）接種培養(yǎng)

　　根據(jù)對樣品霉菌污染程度的初步判斷，選擇2-3個(gè)適宜稀釋度的稀釋液。例如，若懷疑樣品霉菌污染程度較高，可選擇1:100、1:1000、1:10000三個(gè)稀釋度。用無菌吸管分別吸取0.1mL不同稀釋度的稀釋液，注入無菌培養(yǎng)皿中，每個(gè)稀釋度重復(fù)2-3個(gè)培養(yǎng)皿。

　　將冷卻至（46±1）℃的孟加拉紅培養(yǎng)基傾注到含有稀釋液的培養(yǎng)皿中，每皿約15-20mL，迅速輕輕搖勻，使稀釋液與培養(yǎng)基充分混合。待培養(yǎng)基凝固后，將培養(yǎng)皿倒置放入（28±1）℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5-7天。倒置培養(yǎng)皿是為了防止培養(yǎng)過程中產(chǎn)生的冷凝水落到培養(yǎng)基表面，影響霉菌菌落的生長和計(jì)數(shù)，同時(shí)也可減少外界微生物對培養(yǎng)基的污染。

　?。?）菌落計(jì)數(shù)

　　培養(yǎng)結(jié)束后，從恒溫培養(yǎng)箱中取出培養(yǎng)皿，在明亮處進(jìn)行霉菌菌落計(jì)數(shù)。選擇菌落數(shù)在10-150CFU之間的培養(yǎng)皿進(jìn)行計(jì)數(shù)。若所有稀釋度的培養(yǎng)皿中菌落數(shù)均大于150CFU，則選擇菌落數(shù)最多的稀釋度，計(jì)數(shù)該稀釋度下培養(yǎng)皿中的全部菌落數(shù)；若所有稀釋度的培養(yǎng)皿中菌落數(shù)均小于10CFU，則選擇菌落數(shù)最少的稀釋度進(jìn)行計(jì)數(shù)。

　　計(jì)數(shù)時(shí)，注意區(qū)分霉菌菌落與其他雜質(zhì)或細(xì)菌菌落。霉菌菌落一般較大，形態(tài)多樣，如絨毛狀、絮狀、蜘蛛網(wǎng)狀等，顏色豐富，有黑色、綠色、黃色、白色等；而細(xì)菌菌落相對較小、光滑濕潤。對于難以區(qū)分的菌落，可借助顯微鏡進(jìn)一步觀察其形態(tài)特征，以準(zhǔn)確判斷是否為霉菌菌落。

　　計(jì)算霉菌總數(shù)時(shí)，先計(jì)算同一稀釋度下兩個(gè)或多個(gè)培養(yǎng)皿中霉菌菌落數(shù)的平均值，再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)，即為每克潤膚膏霜樣品中的霉菌總數(shù)（CFU/g）。例如，1:1000稀釋度的三個(gè)培養(yǎng)皿中霉菌菌落數(shù)分別為35、40、45CFU，其平均值為（35+40+45）÷3=40CFU，則樣品中的霉菌總數(shù)為40×1000=40000CFU/g。